Plasmide CRISPR/Cas9 KO Radical Fringe (m): sc-422659

Présentation

Rfng code Radical Fringe, une β1,3‑N‑acétylglucosaminyltransférase localisée dans l’appareil de Golgi, qui modifie les résidus d’O‑fucose portés par les répétitions de type EGF des récepteurs Notch, modulant ainsi l’intensité du signal Notch dépendant des ligands. Par un renforcement dépendant du contexte des interactions avec les ligands de type Delta plutôt qu’avec Jagged/Serrate, Radical Fringe contribue à réguler les décisions de destinée cellulaire, la formation de frontières et l’organisation des tissus au cours du développement ainsi que dans les compartiments de cellules souches/progénitrices à l’âge adulte. Des altérations de la glycosylation médiée par Fringe peuvent déplacer la sortie de la voie Notch et les programmes transcriptionnels en aval qui contrôlent la prolifération et la différenciation. La dérégulation du signal Notch est impliquée dans de nombreux processus pertinents pour les maladies, faisant de Rfng un nœud utile pour disséquer des phénotypes pilotés par Notch dans des modèles murins cellulaires et in vivo.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Radical Fringe (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Rfng dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Rfng, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Rfng à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Radical Fringe.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Rfng pour l'étude de la signalisation de Radical Fringe, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Rfng essentiels à la fonction de Radical Fringe
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Rfng pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Radical Fringe plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Radical Fringe plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Rfng. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Radical Fringe plasmide HDR (m) et le Radical Fringe (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Rfng pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Rfng définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.