Plásmido Doble Nickase (h) Rad54: sc-401750-NIC

RAD54L codifica la ATPasa humana Rad54 dependiente de ADN, un componente central de la recombinación homóloga que remodela la cromatina y promueve la invasión de cadena mediada por RAD51 durante la reparación de roturas de doble hebra del ADN. Rad54 funciona dentro de la red de reparación del ADN de la anemia de Fanconi/BRCA para sostener la estabilidad de las horquillas de replicación, facilitar la reparación posreplicativa y preservar la integridad del genoma bajo estrés genotóxico. La alteración de RAD54L perturba la recombinación de alta fidelidad y puede desviar la reparación hacia vías propensas a errores, contribuyendo a los reordenamientos cromosómicos y a la acumulación de mutaciones observados en la biología del cáncer. Por ello, RAD54L se utiliza ampliamente como punto de entrada mecanístico para estudiar la señalización de la respuesta al daño del ADN, la dinámica de la recombinación y los determinantes de la inestabilidad genómica.

Rad54 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus RAD54L en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de RAD54L. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de RAD54L. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con RAD54L alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.