Rad21 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422577

Descripción general

Rad21 codifica una subunidad central del complejo cohesina que estabiliza la cohesión de las cromátidas hermanas y organiza la estructura de la cromatina de orden superior. Mediante la carga de cohesina y su liberación regulada durante el ciclo celular, RAD21 favorece una segregación cromosómica precisa, la reparación de roturas de doble cadena del ADN y la estabilidad de la horquilla de replicación, vinculándose a las vías de mantenimiento del genoma. El plegamiento de la cromatina mediado por RAD21 también contribuye a la regulación transcripcional al coordinar los contactos potenciador–promotor y las interacciones con factores como CTCF. La alteración o desregulación de componentes de la cohesina, incluido RAD21, se asocia con inestabilidad cromosómica y fenotipos del desarrollo relacionados con la cohesina, lo que convierte a Rad21 en un objetivo clave para estudios mecanísticos en modelos murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Rad21 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Rad21 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Rad21 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Rad21 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Rad21.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Rad21 para la investigación de la señalización de Rad21, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Rad21 críticos para la función de Rad21
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Rad21 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Rad21 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Rad21 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Rad21. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Rad21 (m) y el plásmido HDR Rad21 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Rad21 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Rad21 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.