Plásmido CRISPR de Activación (h) RACK1: sc-400800-ACT

RACK1 humano (receptor for activated C kinase 1; GNB2L1) es una proteína andamiaje multifuncional con repeticiones WD que integra las señales derivadas de la proteína quinasa C y de otras vías con el control de la traducción asociado al ribosoma. Se localiza en la subunidad ribosomal 40S y coordina la traducción de ARNm, las respuestas al estrés y la organización del citoesqueleto, influyendo así en la adhesión, la migración y la proliferación celulares. RACK1 participa en redes de señalización vinculadas a factores de crecimiento e integrinas, incluido el “cross-talk” entre las vías MAPK y PI3K/AKT, y puede modular complejos de quinasas y fosfatasas en sitios subcelulares específicos. La expresión o señalización desregulada de RACK1 se ha asociado con alteraciones en la señalización oncogénica, fenotipos metastásicos y la remodelación de vías inflamatorias en múltiples contextos celulares relevantes para la enfermedad.

RACK1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RACK1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

RACK1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RACK1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RACK1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de RACK1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RACK1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de RACK1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía RACK1 en células tumorales con expresión de RACK1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.