Rac GAP1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402969-ACT

RACGAP1 kodiert das Rac-GTPase-aktivierende Protein 1 (Rac GAP1), einen Regulator der Rho-Familie, der den Umbau des Zytoskeletts mit der Zellzyklusprogression koordiniert. Rac GAP1 ist ein zentraler Bestandteil des Centralspindlin-Komplexes und unterstützt die RhoA-abhängige Bildung des kontraktilen Rings, die Organisation der Spindelmittelzone sowie den Abschluss der Zytokinese. Durch die Modulation der Rac1/Cdc42-Signalgebung und der mitotischen Maschinerie beeinflusst RACGAP1 Zellpolarität, Migration und chromosomale Stabilität. Eine dysregulierte RACGAP1-Expression wurde in der Krebsbiologie mit proliferativen Phänotypen und genomischer Instabilität in Verbindung gebracht und ist daher relevant für Studien zur mitotischen Kontrolle und zu Teilungsprogrammen von Tumorzellen.

Rac GAP1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen RACGAP1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Rac GAP1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des RACGAP1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der RACGAP1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Rac GAP1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native RACGAP1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Rac GAP1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Rac GAP1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem RACGAP1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.