Rac 1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-400175-LAC

RAC1 kodiert die kleine GTPase Rac1, einen molekularen Schalter der Rho-Familie, der durch den Wechsel zwischen GDP- und GTP-gebundenen Zuständen den Umbau des Aktinzytoskeletts, Membranruffling und die Zellpolarität koordiniert. Über nachgeschaltete Effektoren wie PAKs und den WAVE/Arp2/3-Komplex reguliert Rac1 die Dynamik von Zelladhäsionen, den Vesikeltransport und die gerichtete Zellmigration und ist zudem mit der PI3K-Signalgebung sowie der NADPH-Oxidase-abhängigen ROS-Produktion verknüpft. Die RAC1-Aktivität beeinflusst Proliferation, Überleben und Transkriptionsprogramme und integriert Signale von Wachstumsfaktorrezeptoren und Integrinen. Eine fehlregulierte RAC1-Signalgebung wird mit mehreren krankheitsrelevanten Prozessen in Verbindung gebracht, darunter invasive Phänotypen, veränderte Motilität von Immunzellen und aberrante entzündliche Signalwege, weshalb RAC1 häufig im Fokus mechanistischer Zellbiologie- und Signalwegstudien steht.

Rac 1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente RAC1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Rac 1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der RAC1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Rac 1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen RAC1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.