Plasmide CRISPR/Cas9 KO RABAPTIN-5 (h): sc-403303

Présentation

RABEP1 code pour RABAPTIN-5, un effecteur de Rab5 qui coordonne le trafic endocytaire précoce en favorisant l’arrimage des vésicules et les événements de fusion au niveau des endosomes précoces. Grâce à ses interactions avec les GTPases de la famille Rab5 et la machinerie de tri endosomal, RABAPTIN-5 contribue à réguler l’internalisation des récepteurs, l’orientation du cargo vers le recyclage ou la dégradation, ainsi que la maturation des endosomes. Ces processus modulent la signalisation issue des récepteurs de surface et le renouvellement des protéines membranaires, reliant la fonction de RABEP1 à des voies contrôlant la signalisation par les facteurs de croissance, l’absorption des nutriments et l’homéostasie membranaire. Une dérégulation du contrôle endocytaire et du trafic dépendant de Rab5 a été associée à des dynamiques de signalisation altérées et à des phénotypes cellulaires observés dans la biologie du cancer et dans des modèles pertinents pour les maladies neurodégénératives.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RABAPTIN-5 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RABEP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RABEP1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RABEP1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RABAPTIN-5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RABEP1 pour l'étude de la signalisation de RABAPTIN-5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RABEP1 essentiels à la fonction de RABAPTIN-5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RABEP1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RABAPTIN-5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le RABAPTIN-5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RABEP1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RABAPTIN-5 plasmide HDR (h) et le RABAPTIN-5 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RABEP1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RABEP1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.