Rab11-FIP5 Lentiviral Activation Particles (h): sc-407779-LAC

RAB11FIP5 kodiert Rab11-FIP5, ein mit der Rab11-Familie interagierendes Protein, das als Effektor im Rab11-abhängigen Transport über Recycling-Endosomen fungiert. Durch die Verknüpfung Rab11-positiver Membranen mit Motorproteinen sowie Andock- und Tethering-Maschinerie hilft Rab11-FIP5, die Frachtsortierung, das endozytotische Recycling und die Membranlieferung zu koordinieren, die für Polarität, Zytokinese und Rezeptorumsatz erforderlich sind. Diese Prozesse sind in Vesikeltransportnetzwerke eingebunden, die Signalstärke und Membranzusammensetzung steuern, wodurch RAB11FIP5 ein nützlicher Knotenpunkt zur Untersuchung der Regulation endosomaler Signalwege ist. Eine fehlregulierte endozytotische Wiederverwertung wurde mit verschiedenen krankheitsrelevanten Phänotypen in Verbindung gebracht, darunter veränderte Rezeptorsignale, abnorme Zellmigration und Veränderungen der Funktion von Immunzellen.

Rab11-FIP5 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente RAB11FIP5-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Rab11-FIP5 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der RAB11FIP5-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Rab11-FIP5-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen RAB11FIP5-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.