Rab11-FIP1 Double Nickase Plasmid (h): sc-407521-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Rab11-FIP1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Rab11-FIP1 Double-Nickase-Plasmid (h) und Rab11-FIP1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf RAB11FIP1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Rab11-FIP1: sc-517228
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Rab11-FIP1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-407521-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Rab11-FIP1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-407521-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RAB11FIP1 kodiert Rab11-FIP1, einen Effektor der Rab11-Familie, der den Rab11-abhängigen Transport über Recycling-Endosomen sowie das Membranrecycling zur Plasmamembran koordiniert. Über Interaktionen mit kleinen GTPasen sowie Motor- und Adapterproteinen trägt Rab11-FIP1 zur Regulation des Rezeptorrecyclings, des polarisierten Transports, der Zytokinese und zur Aufrechterhaltung der Architektur epithelialer Zellen bei. Diese Prozesse beeinflussen Signalausgänge und Zellmotilität, indem sie die Lokalisation und den Umsatz von Membranproteinen – einschließlich Rezeptoren und Adhäsionsmolekülen – steuern. Eine fehlregulierte endosomale Recyclingmaschinerie und Rab11-FIP1-assoziierte Transportprogramme wurden in der Krebsbiologie mit verändertem Proliferations- und Migrationsverhalten in Verbindung gebracht sowie mit weiter gefassten Defekten in Vesikeltransportwegen, die für Neurobiologie und metabolische Regulation relevant sind.
Rab11-FIP1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des RAB11FIP1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von RAB11FIP1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die RAB11FIP1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit RAB11FIP1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.