Rab GDI β Double Nickase Plasmid (h): sc-404136-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Rab GDI β Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Rab GDI β Double-Nickase-Plasmid (h) und Rab GDI β Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GDI2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Rab GDI β: sc-515143
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Rab GDI β Double Nickase Plasmid (h) | sc-404136-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Rab GDI β Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404136-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GDI2 kodiert den Rab-GDP-Dissoziationsinhibitor Beta (Rab GDI β), ein zytosolisches Chaperon, das an prenylierte Rab-GTPasen bindet und deren Ablösung von Membranen sowie ihr Recycling zwischen endomembranären Kompartimenten reguliert. Durch die Kontrolle der Rab-Verfügbarkeit und der Membranadressierung beeinflusst Rab GDI β Vesikelknospung, -transport und -fusion – zentrale Prozesse der Endozytose, Exozytose und des Transports vom Golgi zu Endosomen. Diese Regulation wirkt sich auf den Rezeptorumsatz, die Dynamik des sekretorischen Weges und die Organellenidentität innerhalb des Rab-GTPase-Zyklus aus. Fehlregulierter Rab-Transport und eine gestörte Funktion von Rab-Regulatoren werden mit zellulären Stressantworten und einer veränderten Proteostase in mehreren krankheitsrelevanten Kontexten in Verbindung gebracht, was den Einsatz von GDI2-Perturbationen zur Untersuchung trafficking-abhängiger Phänotypen unterstützt.
Rab GDI β Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GDI2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GDI2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GDI2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GDI2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.