Rab GDI β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404136

Übersicht

GDI2 kodiert den Rab-GDP-Dissoziationsinhibitor Beta (Rab GDI β), einen zytosolischen Regulator, der an preny­lierte Rab-GTPasen bindet und deren Zyklus zwischen Membranen und dem Zytosol steuert. Durch die Modulation von Rab-Lokalisierung und -Verfügbarkeit für die Aktivierung trägt Rab GDI β dazu bei, das Abschnüren, Andocken und Fusionieren von Vesikeln zu koordinieren – Schritte, die für endozytotischen Transport, Recyclingwege und den Transport vom Golgi zum Endosom essenziell sind. Eine Störung der Rab-GDI-β-Funktion kann die Homöostase des Membrantransports beeinträchtigen und dadurch den Rezeptorumsatz, die Kompartimentierung von Signalwegen und die Dynamik von Organellen beeinflussen. Eine veränderte Expression oder Regulation von Rab GDI2 wurde im Zusammenhang mit zellulären Phänotypen untersucht, die für die Krebsbiologie und die Neurobiologie relevant sind, in denen vesikulärer Transport und Proteostase entscheidend sind.

Das Rab GDI β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GDI2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GDI2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GDI2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Rab GDI β-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GDI2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Rab GDI β-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GDI2-Exone abzielen, die für die Rab GDI β-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GDI2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Rab GDI β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Rab GDI β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GDI2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Rab GDI β HDR-Plasmid (h) und Rab GDI β HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GDI2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GDI2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.