Plasmide CRISPR/Cas9 KO Rab GDI β (h): sc-404136

Présentation

GDI2 code pour l’inhibiteur de dissociation du GDP des Rab bêta (Rab GDI β), un régulateur cytosolique qui se lie aux GTPases Rab prénylées et contrôle leur cycle entre les membranes et le cytosol. En modulant la localisation des Rab et leur disponibilité pour l’activation, Rab GDI β contribue à coordonner les étapes de bourgeonnement, d’arrimage et de fusion des vésicules, essentielles au trafic endocytique, aux voies de recyclage et au transport du Golgi vers les endosomes. Une perturbation de la fonction de Rab GDI β peut dérégler l’homéostasie du trafic membranaire, affectant le renouvellement des récepteurs, la compartimentation de la signalisation et la dynamique des organites. Des altérations d’expression ou de régulation de Rab GDI2 ont été étudiées dans le cadre de phénotypes cellulaires pertinents pour la biologie du cancer et la neurobiologie, où le transport vésiculaire et la protéostasie sont critiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Rab GDI β (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GDI2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GDI2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GDI2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Rab GDI β.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GDI2 pour l'étude de la signalisation de Rab GDI β, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GDI2 essentiels à la fonction de Rab GDI β
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GDI2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Rab GDI β plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Rab GDI β plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GDI2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Rab GDI β plasmide HDR (h) et le Rab GDI β (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GDI2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GDI2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.