Rab GDI α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404659

Übersicht

GDI1 kodiert den Rab-GDP-Dissoziationsinhibitor alpha (Rab GDI α), ein zytosolisches Chaperon, das an preny­lierte Rab‑GTPasen bindet und deren Ablösung von Membranen, Solubilisierung sowie das Recycling zwischen Donor- und Akzeptor-Kompartimenten reguliert. Durch die Kontrolle von Verfügbarkeit und Lokalisation der Rab-Proteine trägt Rab GDI α dazu bei, Vesikelknospung, -transport und -fusion entlang endozytotischer und sekretorischer Wege zu koordinieren und damit Organellenidentität und Sortierung von Fracht zu unterstützen. Eine Störung von GDI1 beeinträchtigt Rab-abhängige Transportnetzwerke, die für den synaptischen Vesikelzyklus und die neuronale Homöostase entscheidend sind, und verknüpft so veränderten Membrantransport mit neuroentwicklungsbezogenen und neurologischen Krankheitsphänotypen. Als zentraler Knotenpunkt der Regulation kleiner GTPasen wird GDI1 häufig im Kontext von Endosomendynamik, Golgi‑zu‑Plasmamembran‑Transport und synaptischer Funktion untersucht.

Das Rab GDI α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GDI1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GDI1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GDI1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Rab GDI α-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GDI1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Rab GDI α-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GDI1-Exone abzielen, die für die Rab GDI α-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GDI1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Rab GDI α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Rab GDI α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GDI1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Rab GDI α HDR-Plasmid (h) und Rab GDI α HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GDI1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GDI1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.