Particules Lentivirales d'Activation (m) Rab 7: sc-422571-LAC

Rab7 code pour Rab7, une petite GTPase qui régule la maturation des endosomes tardifs, le trafic endosome–lysosome et la dégradation lysosomale via le recrutement coordonné de complexes effecteurs impliqués dans l’arrimage et la fusion des vésicules. Dans les cellules de souris, l’activité de Rab7 s’intègre aux voies de l’autophagie et de la biogenèse des lysosomes, influençant le renouvellement des cargos, la diminution des récepteurs et le remodelage membranaire. Un trafic dépendant de Rab7 dérégulé peut perturber la protéostase et le contrôle qualité des organites, des processus pertinents pour la neurodégénérescence, la biologie des infections et le métabolisme des cellules cancéreuses. En tant que nœud central du réseau endolysosomal, Rab7 est largement utilisé pour étudier le flux endocytaire, la fusion autophagosome–lysosome et le trafic des pathogènes intracellulaires.

Les particules d'activation lentivirales Rab 7 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Rab7 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Rab 7 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Rab7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Rab 7. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Rab7 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.