Rab 5C CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403247-ACT

ヒトRAB5Cは、初期エンドソームの融合、受容体介在性エンドサイトーシス、および膜リサイクリングやシグナル持続時間を規定するエンドソーム輸送ダイナミクスを制御する低分子GTPアーゼRab 5Cをコードします。Rab 5CはGDP結合型とGTP結合型の間を循環することで、小胞のテザリング、カーゴの選別、ホスホイノシチドのリモデリングに関与するエフェクターのリクルートを統括し、成長因子受容体のターンオーバーや栄養取り込みなどの経路に影響を与えます。Rab5ファミリーの活性は細胞骨格依存の輸送やエンドソームからリソソームへの輸送経路とも連動しており、増殖、極性形成、細胞外シグナルへの応答といった過程に影響します。エンドサイトーシス輸送の破綻やRab5依存性シグナル異常は、がんに伴う受容体の過剰活性化、輸送障害に起因する神経変性の機序、ならびに病原体が宿主のエンドソーム侵入経路を悪用する感染生物学などと関連づけられています。

Rab 5C CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RAB5Cの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Rab 5C CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RAB5C 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRAB5C転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Rab 5Cの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRAB5C遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRab 5C依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRAB5C発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRab 5C経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。