Rab 3B CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403407-ACT

RAB3B kodiert Rab3B, eine in Neuronen und endokrinen Zellen angereicherte kleine GTPase, die den Ca2+-abhängigen Vesikeltransport und die stimulusgekoppelte Exozytose reguliert. Als molekularer Schalter, der zwischen GDP- und GTP-gebundenen Zuständen wechselt, koordiniert Rab3B über Interaktionen mit Rab-Effektoren das Andocken und Priming von Vesikeln und trägt so zur Dynamik synaptischer Vesikel und zu regulierten Sekretionswegen bei. RAB3B-assoziierte Veränderungen in vesikulären Transportnetzwerken sind relevant für Studien zur neuroendokrinen Signalübertragung und zu sekretionsabhängigen zellulären Phänotypen; zudem wurde eine dysregulierte Rab-GTPase-Schaltkreise in neurologischen sowie krebsassoziierten Kontexten untersucht. Dieses Gen wird daher häufig eingesetzt, um Kontrollpunkte des Membrantransports zu untersuchen, die Sekretion, Neurotransmission und die Zuverlässigkeit des intrazellulären Transports prägen.

Rab 3B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen RAB3B-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Rab 3B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des RAB3B-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der RAB3B-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Rab 3B-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native RAB3B-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Rab 3B-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Rab 3B-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem RAB3B-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.