Rab 33B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404070

Übersicht

RAB33B kodiert die kleine GTPase Rab33B, ein Mitglied der Rab-Familie, das Membrantransportprozesse an der Golgi-ER-Schnittstelle koordiniert. Rab33B reguliert die Vesikelbildung, die Sortierung von Fracht sowie die Homöostase des Golgi-Apparats und wurde mit autophagieassoziierten Transport-Schritten in Verbindung gebracht, die die Dynamik von Organellen beeinflussen. Durch diese Funktionen trägt es zur Organisation des sekretorischen Weges und zur Zuverlässigkeit des intrazellulären Transports bei – Prozesse, die bei neuroentwicklungsbedingten und neurodegenerativen Phänotypen häufig gestört sind. Eine veränderte RAB33B-Funktion wurde mit syndromalen Skelett- und Entwicklungsstörungen assoziiert, was seine Relevanz für die Untersuchung einer transportabhängigen zellulären Homöostase unterstreicht.

Das Rab 33B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RAB33B-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RAB33B-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RAB33B nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Rab 33B-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RAB33B-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Rab 33B-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RAB33B-Exone abzielen, die für die Rab 33B-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RAB33B-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Rab 33B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Rab 33B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RAB33B-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Rab 33B HDR-Plasmid (h) und Rab 33B HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RAB33B-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RAB33B-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.