Rab 25 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404721

Panoramica

RAB25 codifica Rab25, una piccola GTPasi della famiglia Rab che regola la gemmazione, il traffico e il riciclo delle vescicole, con ruoli importanti nel trasporto verso la membrana apicale e nello smistamento endosomiale. Controllando la consegna dei carichi e il riciclo dei recettori, Rab25 influenza la polarità epiteliale, il turnover delle integrine e la propagazione del segnale attraverso vie legate all’adesione e alla migrazione cellulare. Un’alterata espressione di RAB25 e dei circuiti di traffico a esso associati è stata collegata alla biologia tumorale in modo dipendente dal contesto, includendo effetti sull’invasività e sull’adattamento metabolico. In quanto nodo del traffico intracellulare, Rab25 è rilevante anche per lo studio della dinamica di membrana, dell’organizzazione delle giunzioni strette e della segnalazione mediata dai recettori nelle cellule umane polarizzate.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Rab 25 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RAB25 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RAB25 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RAB25 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Rab 25.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RAB25 per lo studio della segnalazione di Rab 25, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RAB25 critici per la funzione di Rab 25
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RAB25 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Rab 25 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Rab 25 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RAB25. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Rab 25 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Rab 25 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RAB25 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RAB25 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.