Rab 1A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422550
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Rab 1A Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im Rab 1A-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Rab 1A: sc-377201
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Rab 1A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-422550 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Rab1a kodiert Rab 1A, eine kleine GTPase, die den frühen sekretorischen Transport reguliert, indem sie den Vesikeltransport vom ER zum Golgi sowie den Transport innerhalb des Golgi koordiniert – einschließlich Vesikelknospung, Andocken (Tethering) und Fusionsereignissen. Durch den Wechsel zwischen GTP- und GDP-gebundenen Zuständen rekrutiert Rab 1A Effektor-Komplexe, die die Golgi-Organisation, Proteinprozessierung und Frachtzustellung beeinflussen und damit die Proteostase sowie die Homöostase von Organellen unterstützen. Der Rab1a-abhängige Transport ist zudem mit Autophagie- und lysosomalen Signalwegen verknüpft, indem er die Membranbereitstellung und die Reifung von Kompartimenten steuert. Eine Fehlregulation des Rab1a-assoziierten Transports wurde in der Literatur mit zellulären Stressantworten und Phänotypen in Verbindung gebracht, die für Neurodegeneration und onkogene Signalgebung relevant sind, was Rab1a zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung krankheitsrelevanter, membrantransportgetriebener Mechanismen in Mausmodellen macht.
Das Rab 1A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Rab1a-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Rab1a-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Rab1a nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Rab 1A-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Rab1a-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Rab 1A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Rab1a-Exone abzielen, die für die Rab 1A-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Rab1a-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom Rab 1A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Rab 1A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Rab1a-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Rab 1A HDR-Plasmid (m) und Rab 1A HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Rab1a-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Rab1a-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.