Rab 18 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-417193

Übersicht

RAB18 kodiert Rab18, eine kleine GTPase aus der Rab-Familie, die den intrazellulären Membrantransport reguliert, mit besonders wichtigen Funktionen an der Schnittstelle zwischen endoplasmatischem Retikulum (ER) und Lipidtröpfchen. Rab18 koordiniert Vesikeltransport, Organelle-Tethering und die ER-Morphologie, indem es zwischen GDP- und GTP-gebundenen Zuständen wechselt und mit membranassoziierten Effektoren interagiert. Störungen des RAB18-abhängigen Transports können die Lipidhomöostase, die Dynamik des sekretorischen Weges sowie autophagiebezogene Prozesse beeinflussen. Genetische und funktionelle Studien haben eine RAB18-Fehlfunktion mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und zellulären Stressantworten in Verbindung gebracht, was seine Relevanz in Modellen der Biologie neurologischer Erkrankungen und stoffwechselassoziierter Signalwege unterstreicht.

Das Rab 18 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RAB18-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RAB18-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RAB18 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Rab 18-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RAB18-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Rab 18-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RAB18-Exone abzielen, die für die Rab 18-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RAB18-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Rab 18 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Rab 18 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RAB18-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Rab 18 HDR-Plasmid (h) und Rab 18 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RAB18-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RAB18-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.