Rab 14 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-427035

Übersicht

Rab14 kodiert Rab14, eine kleine GTPase, die den vesikulären Transport zwischen Endosomen, dem Golgi-Apparat und der Plasmamembran reguliert und dabei die Sortierung von Fracht sowie das Recycling von Membranen koordiniert. Rab14 ist an endozytotischem Recycling und sekretorischen Transportprozessen beteiligt, die die Verfügbarkeit von Rezeptoren, die Lokalisation von Nährstofftransportern und die Membrandynamik beeinflussen. Über seine Funktionen bei der Endosomenreifung und der Organisation von Trafficking-Knotenpunkten wirkt Rab14 auf Signalwege ein, die mit Zellpolarität, Zytokinese und metabolischer Regulation verknüpft sind. Eine fehlregulierte, Rab14-abhängige Trafficking-Aktivität wurde in experimentellen Systemen mit Phänotypen in Zusammenhang gebracht, die für onkogene Signalgebung, insulinabhängigen Transport und das Remodeling von pathogenenhaltigen Vakuolen relevant sind.

Das Rab 14 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Rab14-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Rab14-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Rab14 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Rab 14-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Rab14-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Rab 14-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Rab14-Exone abzielen, die für die Rab 14-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Rab14-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Rab 14 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Rab 14 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Rab14-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Rab 14 HDR-Plasmid (m) und Rab 14 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Rab14-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Rab14-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.