Rab 11B CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402256-ACT

RAB11B kodiert die kleine GTPase Rab11B, einen zentralen Regulator der Dynamik von Recycling-Endosomen, der den Membrantransport von Endosomen zurück zur Plasmamembran und durch das trans-Golgi-Netzwerk koordiniert. Durch den Wechsel zwischen GDP- und GTP-gebundenen Zuständen hilft Rab11B, Vesikelabschnürung, -transport und -fusion zu steuern, die das Recycling von Rezeptoren, den Turnover von Integrinen und die polarisierte Lieferung von Fracht bestimmen. Die Signalwege der Rab11-Familie greifen über Effektor-Interaktionen, die die Aktinorganisation und die Membranzusammensetzung beeinflussen, in Programme des Zytoskelett-Remodelings und der Zellmigration ein. Eine fehlregulierte endozytotische Recycling- und Vesikeltransportaktivität im Zusammenhang mit RAB11B wurde mit einer veränderten Signalhomöostase und Phänotypen in Verbindung gebracht, die für die Invasion von Krebszellen, die Neurobiologie und allgemeinere, trafficking-bezogene Krankheitsmechanismen relevant sind.

Rab 11B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen RAB11B-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Rab 11B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des RAB11B-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der RAB11B-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Rab 11B-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native RAB11B-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Rab 11B-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Rab 11B-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem RAB11B-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.