Plasmide Double Nickase (h) Rab 11A: sc-400617-NIC

RAB11A code la petite GTPase Rab11A, un régulateur central de la dynamique des endosomes de recyclage et du trafic membranaire, qui coordonne le recyclage endocytique, le bourgeonnement des vésicules et l’acheminement des cargos vers la membrane plasmique. Rab11A agit avec les protéines interagissant avec la famille Rab11 et l’exocyste pour contrôler le recyclage des récepteurs, le renouvellement des intégrines, le transport polarisé et l’abscission cytokinétique, ce qui la relie au remodelage du cytosquelette et à la migration cellulaire. Par ses rôles dans le tri et le trafic des récepteurs de signalisation et des composants jonctionnels, Rab11A influence des voies qui façonnent la polarité épithéliale et la réactivité aux facteurs de croissance. Un trafic dépendant de Rab11A dérégulé a été associé à des modifications de l’invasion et du comportement métastatique dans des modèles de cancer, et une perturbation du recyclage endosomal a également été impliquée dans des mécanismes de maladies neurodégénératives et infectieuses.

Rab 11A Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RAB11A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RAB11A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RAB11A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RAB11A.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.