R7BP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-415971-ACT

RGS7BP codifica a R7BP, uma subunidade auxiliar de ancoragem à membrana que se liga a proteínas RGS da família R7, como RGS7/RGS9, e modula a sua localização e atividade na sinalização de receptores acoplados à proteína G (GPCR). Ao promover o direcionamento para a membrana e a estabilidade do complexo, a R7BP influencia a terminação de sinais mediada por Gi/o e a dinâmica de segundos mensageiros a jusante, incluindo a regulação de AMPc e de canais iónicos em células excitáveis. Este eixo regulatório está implicado na integração de sinais neuronais e na plasticidade sináptica, e alterações na sinalização associada a RGS7BP têm sido relacionadas com a biologia de doenças neuropsiquiátricas e neurodegenerativas por meio de um controlo desregulado das vias de GPCR. Assim, a RGS7BP é utilizada como um ponto de entrada molecular para investigar a cinética da sinalização por GPCR, o tráfego membranar e a responsividade de redes neuronais.

R7BP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RGS7BP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

R7BP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RGS7BP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RGS7BP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de R7BP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RGS7BP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de R7BP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via R7BP em células tumorais com expressão de RGS7BP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.