R-Spondin3 Double Nickase Plasmid (h): sc-404472-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das R-Spondin3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- R-Spondin3 Double-Nickase-Plasmid (h) und R-Spondin3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf RSPO3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
R-Spondin3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404472-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
R-Spondin3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404472-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RSPO3 kodiert R-Spondin3, einen sezernierten Agonisten der kanonischen Wnt-Signalübertragung, der die Aktivität von Frizzled/LRP-Rezeptoren verstärkt, indem er an LGR4/5/6 bindet und den durch RNF43/ZNRF3 vermittelten Turnover von Wnt-Rezeptoren moduliert. Über diese Achse reguliert R-Spondin3 die Aufrechterhaltung von Stamm- und Vorläuferzellen, die epitheliale Erneuerung, angiogene Programme und die Gewebemorphogenese. Eine RSPO3-abhängige Signalgebung beeinflusst β-Catenin-gesteuerte Transkriptionsnetzwerke, die Zellschicksalsentscheidungen und proliferative Antworten prägen. Eine fehlregulierte RSPO3-Expression oder -Signalwegaktivierung wurde mit der aberranten Wnt-Signalwegaktivität in mehreren krankheitsrelevanten Kontexten in Verbindung gebracht, was seine Nutzung als mechanistischen Knotenpunkt in Studien zur Signalweg- und Entwicklungsbiologie stützt.
R-Spondin3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des RSPO3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von RSPO3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die RSPO3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit RSPO3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.