Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PXR Double Nickase Plasmid (h): sc-400824-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PXR Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PXR Double-Nickase-Plasmid (h) und PXR Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf NR1I2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PXR: sc-48403
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PXR Double Nickase Plasmid (h) | sc-400824-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PXR Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400824-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NR1I2 kodiert den Pregnan-X-Rezeptor (PXR), einen ligandenaktivierten nukleären Rezeptor, der als Xenobiotika-Sensor fungiert und die Exposition gegenüber Chemikalien mit der transkriptionellen Steuerung von Entgiftungsprogrammen verknüpft. Nach Aktivierung bildet PXR ein Heterodimer mit RXR und bindet an Response-Elemente, um Gene zu regulieren, die an Phase-I/II-Metabolismus und Transport beteiligt sind, darunter CYP3A, UGTs und ABC-Transporter; dabei ist er in Signalwege der Gallensäuren, Lipide und Entzündung integriert. Dieses regulatorische Netzwerk beeinflusst die Homöostase von Leber und Darm und prägt zelluläre Antworten auf Arzneimittel und Umweltchemikalien. Eine fehlregulierte PXR-Signalübertragung wurde mit Unterschieden im Arzneistoffmetabolismus und mit Wechselwirkungen, mit cholestatischen und metabolischen Phänotypen sowie mit kontextabhängigen Effekten bei entzündungsassoziierten Erkrankungen und in der Krebsbiologie in Verbindung gebracht.
PXR Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des NR1I2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von NR1I2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die NR1I2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit NR1I2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.