PXR Plasmide Double Nickase (h): sc-400824-NIC

NR1I2 codifica il recettore X dei pregnani (PXR), un recettore nucleare attivato da ligandi che funge da sensore di xenobiotici, collegando l’esposizione a sostanze chimiche al controllo trascrizionale dei programmi di detossificazione. Una volta attivato, PXR eterodimerizza con RXR e si lega a specifici elementi di risposta per regolare geni coinvolti nel metabolismo e nel trasporto di fase I/II, inclusi CYP3A, le UGT e i trasportatori ABC, integrandosi con le vie di segnalazione degli acidi biliari, dei lipidi e dell’infiammazione. Questa rete regolatoria influenza l’omeostasi epatica e intestinale e modella le risposte cellulari ai farmaci e alle sostanze chimiche ambientali. Un’alterata segnalazione di PXR è stata associata a variabilità nel metabolismo e nelle interazioni tra farmaci, a fenotipi colestatici e metabolici e a effetti dipendenti dal contesto in condizioni associate all’infiammazione e nella biologia dei tumori.

PXR Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NR1I2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NR1I2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NR1I2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NR1I2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.