PTRF Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404669
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- PTRF O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico PTRF, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:PTRF Anticorpo (4a): sc-517589
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
PTRF Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-404669 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
CAVIN1 codifica o fator de liberação da polimerase I e do transcrito (PTRF/cavin-1), um componente estrutural central das cavéolas que coopera com as caveolinas para estabilizar invaginações da membrana plasmática em forma de frasco. O PTRF dá suporte à biogênese e à dinâmica das cavéolas, contribuindo para a homeostase lipídica, a endocitose e a mecanoproteção, e influencia vias de transdução de sinal organizadas na superfície celular. Por meio de suas funções na organização e no tráfego de membranas, o PTRF pode modular a disponibilidade de receptores e as respostas de sinalização a jusante a estímulos mecânicos e metabólicos. A desregulação de CAVIN1/PTRF tem sido associada a alterações na função caveolar na biologia muscular e do tecido adiposo e foi estudada em contextos que incluem fenótipos relacionados à lipodistrofia e o comportamento de células tumorais.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PTRF (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CAVIN1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CAVIN1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CAVIN1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PTRF.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CAVIN1 para a investigação da sinalização de PTRF, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CAVIN1 críticos para a função PTRF
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CAVIN1 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo PTRF Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo PTRF Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CAVIN1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo PTRF Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR PTRF (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CAVIN1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CAVIN1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.