PTPμ CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403126-ACT

PTPRM kodiert die rezeptorartige Protein-Tyrosinphosphatase mu (PTPμ), eine einzelpassige transmembrane Phosphatase, die homophile Zell-Zell-Adhäsion vermittelt und extrazelluläre Kontakte mit der intrazellulären Tyrosin-Dephosphorylierung koppelt. Durch die Regulation von Cadherin–Catenin-Komplexen und Substraten an Zellkontakten beeinflusst PTPμ die Barrierefunktion von Epithel und Endothel, die Zellmigration und die Organisation des Zytoskeletts. Die PTPRM-Aktivität greift in die Signalübertragung von Rezeptor-Tyrosinkinasen und nachgeschaltete Wege wie MAPK und PI3K/AKT ein, indem sie phosphorylierungsabhängige Signal-Schwellenwerte feinjustiert. Eine veränderte PTPRM-Expression oder gestörte Kontrolle der Phosphorylierung wird in mehreren krankheitsrelevanten Kontexten mit dysregulierter Adhäsion und invasiven Phänotypen in Verbindung gebracht, was PTPRM zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien zur Gewebeorganisation und zum Gleichgewicht der Signalweiterleitung macht.

PTPμ Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PTPRM-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PTPμ Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PTPRM-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PTPRM-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PTPμ-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PTPRM-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PTPμ-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PTPμ-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PTPRM-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.