PTPβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402100

Übersicht

PTPRB kodiert die Rezeptor-Typ-Protein-Tyrosinphosphatase Beta (PTPβ), eine in Endothelzellen besonders stark exprimierte Phosphatase, die die Signalübertragung von Rezeptor-Tyrosinkinasen ausbalanciert und so die Gefäßentwicklung, die Barrierefunktion und angiogene Reaktionen moduliert. Durch die Dephosphorylierung von Signalproteinen, die mit VEGF-/FGF-Signalwegen und dem Umbau von Zell-Zell-Kontakten verknüpft sind, trägt PTPβ dazu bei, die Migration von Endothelzellen, die Gefäßpermeabilität und die Stabilisierung von Blutgefäßen feinzujustieren. Eine veränderte Aktivität oder Expression von PTPRB wird mit fehlregulierter Angiogenese und gestörter vaskulärer Homöostase in Verbindung gebracht, was das Gen für Untersuchungen zu entzündungsbedingter Gefäßleckage und tumorassoziierter Neovaskularisation relevant macht. Seine regulatorische Rolle in phosphorylierungsabhängigen Signalwegen unterstützt zudem mechanistische Studien zur endothelialen Differenzierung und zur Bildung mikrovaskulärer Netzwerke.

Das PTPβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PTPRB-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PTPRB-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PTPRB nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PTPβ-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PTPRB-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PTPβ-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PTPRB-Exone abzielen, die für die PTPβ-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PTPRB-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PTPβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PTPβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PTPRB-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PTPβ HDR-Plasmid (h) und PTPβ HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PTPRB-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PTPRB-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.