PTH Lentiviral Activation Particles (h): sc-401280-LAC

Humanes PTH kodiert das Parathormon, ein sezerniertes Peptid, das zentral für die Kalzium- und Phosphathomöostase ist, indem es den Knochenumbau, die tubuläre Rückresorption in der Niere und den Vitamin-D-Stoffwechsel reguliert. PTH signalisiert vorwiegend über den PTH1-Rezeptor und aktiviert dabei die cAMP/PKA- sowie die PLC/PKC-Signalwege, wodurch es die osteoblastenvermittelte Kontrolle der Osteoklastenaktivität und den Fluss von Mineralionen beeinflusst. Diese Signalprogramme sind in endokrine Rückkopplungsschleifen eingebettet, die Kalzium-Sensorik und Phosphatverarbeitung einbeziehen, um das systemische Mineralgleichgewicht aufrechtzuerhalten. Eine fehlregulierte PTH-Expression oder -Signalübertragung ist mit Störungen des Mineralstoffwechsels und des Skelettumbaus verbunden und bietet damit eine gut untersuchbare Achse zur Erforschung der endokrinen Kontrolle der Knochen- und Nierenphysiologie.

PTH Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente PTH-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

PTH Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der PTH-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen PTH-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen PTH-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.