PTEN CRISPR Activationプラスミド (m): sc-422475-ACT

マウスPtenは、脂質およびタンパク質のホスファターゼであるPTENをコードしており、PIP3を脱リン酸化することでPI3Kシグナルに拮抗し、その結果AKT/mTOR経路の活性化を抑制して、細胞の増殖・代謝・生存プログラムを制御します。PTENはまた、DNA損傷応答やクロマチン制御に影響する細胞質および核内での機能を介して、ゲノム安定性、細胞周期制御、細胞極性にも寄与します。PTENの機能破綻や発現低下は、多くの組織において増殖シグナルの異常や分化状態の変化と広く関連しており、がん化経路のリワイヤリング研究における中心的ノードとなっています。マウスモデルでは、Ptenの用量効果が、受容体型チロシンキナーゼ、MAPKシグナル、免疫微小環境由来のシグナルとの経路クロストークを解析するためにしばしば用いられます。

PTEN CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Ptenの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PTEN CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Pten 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPten転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PTENの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPten遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPTEN依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPten発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPTEN経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。