PSM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401947

Übersicht

FOLH1 kodiert das prostataspezifische Membranantigen (PSM), eine Typ-II-Transmembran-Metallopeptidase mit Folathydrolase- und NAALADase-Aktivität, die die Verfügbarkeit von extrazellulärem Glutamat und den Folatstoffwechsel moduliert. PSM ist an der peptidaseabhängigen Verarbeitung polyglutamierter Folate und von Neuropeptiden beteiligt und beeinflusst dadurch Aminosäuresignale sowie die Nährstoffverarbeitung an der Zelloberfläche. Beim Menschen wird die FOLH1-Expression breit als molekularer Marker in der Prostatabiologie genutzt und ist zudem in tumorassoziierter Neovaskularisation nachweisbar, was sie für Untersuchungen zur Signalübertragung von Krebszellen, zu Interaktionen im Mikromilieu und zur linien-/gewebespezifischen Regulation relevant macht. Veränderte PSM-Aktivität und -Expression wurden mit krankheitsassoziierten Änderungen des Stoffwechsels und des rezeptorvermittelten Transports in Verbindung gebracht und unterstützen mechanistische Studien in Modellen der Onkologie und Neurobiologie.

Das PSM CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des FOLH1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des FOLH1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von FOLH1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PSM-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von FOLH1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PSM-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf FOLH1-Exone abzielen, die für die PSM-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere FOLH1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PSM CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PSM CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des FOLH1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PSM HDR-Plasmid (h) und PSM HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von FOLH1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten FOLH1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.