Plásmido Doble Nickase (h2) PSK2: sc-418247-NIC-2
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h2)PSK2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa PSK2 (h2) y el plásmido de doble nickasa PSK2 (h22) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a TAOK1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PSK2 Anticuerpo (22): sc-136094
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h2) PSK2 | sc-418247-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El TAOK1 humano (TAO kinase 1), también denominado PSK2, codifica una quinasa de serina/treonina que actúa aguas arriba de la señalización de MAPK, en particular de las cascadas p38 y JNK activadas por estrés, para coordinar la dinámica del citoesqueleto, la organización del centrosoma y los procesos dependientes de microtúbulos importantes para la mitosis y el desarrollo neuronal. La actividad de TAOK1 integra señales derivadas del estrés celular y de las vías de polaridad, influyendo en redes de fosforilación que regulan la apoptosis, la migración y el crecimiento de neuritas. Estudios genéticos y funcionales han implicado la desregulación de TAOK1 en fenotipos del neurodesarrollo y en la reprogramación de la señalización asociada al cáncer, lo que respalda su relevancia para modelos de control alterado de MAPK y de comportamiento celular impulsado por el citoesqueleto. La edición genética de TAOK1 permite la investigación mecanística de la comunicación cruzada entre vías dependientes de quinasas, el mapeo de sustratos de fosforilación y la generación de sistemas isogénicos de células humanas para estudiar relaciones genotipo–fenotipo en contextos relevantes para la enfermedad.
PSK2 El plásmido de doble nicasa (h2) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TAOK1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TAOK1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TAOK1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TAOK1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.