PSD-95 Double Nickase Plasmid (h): sc-400830-NIC

DLG4 kodiert PSD-95 (postsynaptisches Dichteprotein 95), ein zentrales MAGUK-Scaffold-Protein, das exzitatorische Synapsen organisiert, indem es NMDA-Rezeptoren, AMPA-Rezeptorkomplexe und zugehörige Signalproteine in der postsynaptischen Dichte zusammenführt. Über seine PDZ-, SH3- und GK-Domänen reguliert PSD-95 die synaptische Reifung, den Rezeptortransport und aktivitätsabhängige Plastizität und koppelt die glutamaterge Transmission an nachgeschaltete Signalwege, die die Struktur dendritischer Dornen und calciumabhängige Signalübertragung formen. Störungen von PSD-95-zentrierten Komplexen stehen mit veränderter synaptischer Konnektivität und Netzwerk-Erregbarkeit in Zusammenhang, weshalb DLG4 häufig als molekularer Einstiegspunkt zur Untersuchung neuroentwicklungsbedingter und neuropsychiatrischer Krankheitsmechanismen genutzt wird. In humanen neuronalen Modellen wird die Funktion von DLG4 oft analysiert, um den Aufbau von Synapsen, das exzitatorisch/inhibitorische Gleichgewicht und die Dynamik der Rezeptor-Scaffold-Signalgebung zu untersuchen.

PSD-95 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DLG4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DLG4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DLG4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DLG4-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.