pS2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402867

Übersicht

TFF1, auch bekannt als pS2, kodiert einen sezernierten Trefoil-Faktor, der zur Integrität der epithelialen Barriere und zur Reparatur der Schleimhaut beiträgt, indem er die Zellmigration fördert und die Restitution nach Verletzungen reguliert. In menschlichen Geweben wird es besonders stark im Magen- und Brustepithel exprimiert und häufig durch hormonresponsive Transkriptionsprogramme gesteuert, was es mit Differenzierung und luminalen epithelialen Phänotypen in Verbindung bringt. pS2 ist an stress- und entzündungsnahen Signalwegen beteiligt, die die epitheliale Homöostase beeinflussen, einschließlich Interaktionen mit Muzinen und der Modulation wachstumsfaktorassoziierter Antworten. Eine dysregulierte TFF1-Expression wird in Studien zur gastrointestinalen Metaplasie und zur Biologie östrogenrezeptorpositiven Brustkrebses häufig als molekularer Readout verwendet, da sie Veränderungen des epithelialen Zustands und der mikroumgebungsabhängigen Signalgebung widerspiegeln kann.

Das pS2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TFF1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TFF1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TFF1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die pS2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TFF1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der pS2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TFF1-Exone abzielen, die für die pS2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TFF1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom pS2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom pS2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TFF1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das pS2 HDR-Plasmid (h) und pS2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TFF1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TFF1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.