Plasmide Double Nickase (m) PRX V: sc-424925-NIC

Le gène murin *Prdx5* code la peroxyrédoxine V (PRX V), une peroxydase dépendante des thiols qui réduit le peroxyde d’hydrogène et les hydroperoxydes organiques, contribuant ainsi au maintien de l’homéostasie redox cellulaire. PRX V agit au sein des réseaux de défense antioxydante et s’inscrit à l’interface de processus sensibles aux ROS, tels que le métabolisme mitochondrial, la signalisation inflammatoire et l’apoptose régulée par l’état redox. En limitant les dommages oxydatifs aux protéines, aux lipides et aux acides nucléiques, PRX V favorise l’adaptation cellulaire au stress dans des contextes d’activation métabolique ou immunitaire. Une activité PRDX5 dysrégulée et un déséquilibre oxydatif sont fréquemment étudiés dans des modèles de neurodégénérescence, de dysfonction cardiométabolique et de maladies inflammatoires, où la signalisation et les lésions induites par les ROS constituent des variables expérimentales clés.

PRX V Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Prdx5 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Prdx5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Prdx5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Prdx5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.