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PRX IIICRISPR激活质粒(h) | sc-401730-ACT | 20 µg | $397.00 |
PRDX3 编码人过氧化还原蛋白 III(PRX III),这是一种定位于线粒体、依赖硫氧还蛋白的过氧化物酶,可解毒过氧化氢和脂质氢过氧化物,从而维持氧化还原稳态。通过限制线粒体活性氧(ROS)的积累,PRX III 支持氧化磷酸化,保护线粒体膜完整性,并影响氧化还原敏感的信号通路,从而调控代谢、细胞凋亡和炎症反应。PRDX3 的表达或活性改变常在线粒体氧化应激生物学、线粒体功能障碍,以及与癌症、神经退行性变和心脏代谢性疾病相关的氧化还原适应机制研究中被重点关注。作为线粒体抗氧化网络的关键组成部分,PRX III 常用于探究由 ROS 驱动的基因表达变化、生物能量学改变以及应激反应通路的调控。
PRX III CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性PRDX3的表达。
PRX III CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的PRDX3基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于PRDX3转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性PRX III表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的PRDX3位点,并能够研究内源性位点上依赖于PRX III的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在PRDX3表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟PRX III通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。