PRPS2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404095

概要

PRPS2（ホスホリボシルピロリン酸合成酵素2）は細胞質に局在する酵素で、de novo 経路およびサルベージ経路によるプリン／ピリミジンヌクレオチド生合成に必須の主要代謝物である 5-ホスホリボシル-1-ピロリン酸（PRPP）の合成を触媒します。PRPP の利用可能量を制御することで、PRPS2 はリボースリン酸のフラックスを DNA／RNA 合成、ヌクレオチド依存性シグナル伝達、ならびに細胞増殖に結び付け、解糖系およびペントースリン酸経路からの入力を統合します。ヌクレオチド代謝の破綻や PRPP 恒常性の乱れは、がんや遺伝性プリン代謝経路疾患など複数の病態でみられる増殖制御の変化や代謝リプログラミングと関連しています。そのため PRPS2 は、ヒト細胞におけるヌクレオチドストレス、複製ダイナミクス、代謝上の脆弱性の機序を解明する研究で広く解析されています。

PRPS2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPRPS2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PRPS2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PRPS2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PRPS2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PRPS2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PRPS2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PRPS2の機能に不可欠なPRPS2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PRPS2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PRPS2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPRPS2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PRPS2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PRPS2 HDRプラスミド（h）および PRPS2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPRPS2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPRPS2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。