PRP4 kinase Lentiviral Activation Particles (h2): sc-411224-LAC-2

Das menschliche PRPF4B-Gen kodiert die PRP4-Kinase, eine Serin/Threonin-Proteinkinase, die mit dem U4/U6·U5-Tri-snRNP assoziiert und das Prä-mRNA-Spleißen reguliert, indem sie spleißosomale Komponenten phosphoryliert und so den Zusammenbau des Spleißosoms sowie dessen katalytische Aktivierung unterstützt. Über die Kontrolle der Spleißstellenwahl und der Transkript-Reifung verknüpft die PRP4-Kinase die nukleare RNA-Prozessierung mit dem Fortschreiten des Zellzyklus und mit stressresponsiven Signalprogrammen, die auf einer koordinierten Genexpression beruhen. Eine Fehlregulation der PRPF4B-Expression oder -Aktivität wurde mit aberranten Spleißmustern in Krebs und anderen Erkrankungen mit gestörter RNA-Verarbeitung in Verbindung gebracht, was PRPF4B für Studien zur Transkriptom-Umgestaltung und zur Proteomvielfalt relevant macht. Das Gene Editing von PRPF4B in humanen Zellen ermöglicht die mechanistische Untersuchung der Dynamik des Spleißosoms, der Phosphoregulation von Spleißfaktoren und der nachgelagerten Auswirkungen auf alternatives Spleißen, DNA-Schadensantworten und zelluläre Phänotypen in funktionellen Genomik-Workflows.

PRP4 kinase Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente PRPF4B-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

PRP4 kinase Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der PRPF4B-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen PRP4 kinase-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen PRPF4B-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.