Plasmide Double Nickase (h) PrP: sc-401061-NIC

Le gène humain **PRNP** code la protéine prion **PrP**, une protéine de surface cellulaire ancrée par un glycosylphosphatidylinositol (GPI), particulièrement abondante dans le système nerveux et impliquée dans la fonction synaptique, la liaison au cuivre et les réponses cellulaires au stress. PrP subit un trafic endocytaire et un processing constitutifs au sein des voies sécrétoires et endolysosomales, en interaction avec des réseaux de protéostase incluant le système ubiquitine–protéasome et l’autophagie. Le mauvais repliement et la conversion conformationnelle de PrP sont au cœur de la biologie des prions et sont associés à des phénotypes neurodégénératifs caractérisés par l’agrégation protéique et le dysfonctionnement neuronal. **PRNP** est donc largement étudié dans des modèles de mauvais repliement des protéines, de signalisation des microdomaines membranaires et de facteurs de l’hôte influençant la susceptibilité à une propagation de type prion.

PrP Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PRNP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PRNP. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PRNP. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PRNP.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.