protein 4.2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406824

Übersicht

EPB42 kodiert das Erythrozytenmembranprotein 4.2, einen zytoskelettalen Adapter, der die Membran roter Blutkörperchen stabilisiert, indem er den Band-3-(SLC4A1)-Komplex an Spektrin‑Aktin-Verbindungsnetzwerke koppelt. Protein 4.2 unterstützt den Membranzusammenhalt, die bikonkave Zellform und die mechanische Widerstandsfähigkeit während der Passage durch die Mikrozirkulation und ist in Signal- und Regulationswege eingebunden, die Membranorganisation und die Homöostase des Ionentransports steuern. Eine Störung von EPB42 beeinträchtigt die Integrität der Erythrozytenmembran und ist mit Fragilitätsphänotypen roter Blutkörperchen verbunden, wie sie bei hereditären hämolytischen Erkrankungen beobachtet werden, und stellt damit eine mechanistische Verbindung zwischen zytoskelettaler Assemblierung und der hämolysebezogenen Pathophysiologie her. Dieses Gen wird daher häufig genutzt, um Membran‑Zytoskelett‑Interaktionen, die Stöchiometrie von Proteinkomplexen und Stressantworten in der erythroiden Biologie zu untersuchen.

Das protein 4.2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des EPB42-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des EPB42-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von EPB42 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die protein 4.2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von EPB42-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der protein 4.2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf EPB42-Exone abzielen, die für die protein 4.2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere EPB42-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom protein 4.2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom protein 4.2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des EPB42-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das protein 4.2 HDR-Plasmid (h) und protein 4.2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von EPB42-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten EPB42-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.