PROT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-408452

Übersicht

SLC6A7 kodiert PROT (Prolin-Transporter), einen natrium- und chloridabhängigen Transporter der SLC6-Familie in der Plasmamembran, der die hochaffine Aufnahme von L‑Prolin vermittelt. Durch die Steuerung der intrazellulären Prolinverfügbarkeit kann PROT die Aminosäurehomöostase, das Redoxgleichgewicht und die metabolische Kopplung an Signalwege wie den Glutamatkreislauf und die mitochondriale Bioenergetik beeinflussen – insbesondere in neuralen Geweben, in denen der Prolinhaushalt streng reguliert ist. Veränderte Prolinaufnahme und ‑metabolisierung wurden mit neuroentwicklungsbezogenen und neuropsychiatrischen Phänotypen in Verbindung gebracht, unter anderem durch Auswirkungen auf Neurotransmission und zelluläre Stressantworten. SLC6A7 ist daher relevant für die Untersuchung der Transporterbiologie, aminosäureabhängiger Signalgebung und von Mechanismen, die den Prolinfluss mit neuronaler Funktion verknüpfen.

Das PROT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SLC6A7-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SLC6A7-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SLC6A7 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PROT-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SLC6A7-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PROT-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SLC6A7-Exone abzielen, die für die PROT-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SLC6A7-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PROT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PROT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SLC6A7-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PROT HDR-Plasmid (h) und PROT HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SLC6A7-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SLC6A7-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.