Plasmide CRISPR d'Activation (h) Prokineticin-2: sc-403930-ACT

Le gène humain **PROK2** code la **prokinéticine-2**, un peptide sécrété de type chimiokine qui transmet ses signaux principalement via les récepteurs couplés aux protéines G **PROKR1** et **PROKR2**, afin de réguler les flux de calcium, l’activité **MAPK/ERK** et les programmes transcriptionnels en aval. **PROK2** contribue à la signalisation neuroendocrinienne et liée aux rythmes circadiens, à la migration et à la survie neuronales, ainsi qu’à la modulation de la chimiotaxie des cellules inflammatoires et des réponses vasculaires. Dans le système nerveux central, la prokinéticine-2 est associée au développement du bulbe olfactif et au contrôle hypothalamique de la reproduction via la fonction des neurones **GnRH**, tandis que dans les tissus périphériques elle peut influencer le trafic des leucocytes et des voies liées à la douleur. Des altérations de la signalisation **PROK2/PROKR** ont été associées à l’hypogonadisme hypogonadotrope congénital et au syndrome de Kallmann, et sont fréquemment étudiées dans des travaux sur la neuroinflammation, la régulation de l’angiogenèse et la signalisation du microenvironnement tumoral, sans implication quant à des issues cliniques.

Prokineticin-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PROK2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Prokineticin-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PROK2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PROK2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Prokineticin-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PROK2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Prokineticin-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Prokineticin-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de PROK2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.