Plásmido CRISPR de Activación (h) proglucagon: sc-416721-ACT

El GCG humano codifica el proglucagón, una prohormona que se procesa de manera específica según el tejido para generar glucagón en las células α pancreáticas y péptidos incretínicos como GLP‑1 y GLP‑2 en las células L intestinales y en ciertas neuronas. Estos péptidos coordinan el equilibrio energético sistémico al regular la producción hepática de glucosa, la secreción de insulina, las señales de apetito y el crecimiento intestinal, lo que vincula a GCG con la homeostasis endocrina y metabólica. Las hormonas derivadas del proglucagón señalizan principalmente a través de vías de receptores acoplados a proteína G (GPCR) que activan cAMP/PKA y programas de transcripción dependientes de CREB, integrando la detección de nutrientes con respuestas hormonales. La desregulación del procesamiento o la señalización del proglucagón se asocia con alteraciones en la regulación de la glucosa y con fenotipos más amplios de enfermedad metabólica, lo que convierte a GCG en un nodo clave para estudiar la biología de los islotes y los ejes endocrinos intestino–páncreas.

proglucagon El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GCG sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

proglucagon El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GCG en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GCG, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de proglucagon. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GCG y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de proglucagon en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía proglucagon en células tumorales con expresión de GCG silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.