Plasmide CRISPR d'Activation (h) Progesterone Receptor: sc-400198-ACT

PGR code le récepteur humain de la progestérone, un récepteur nucléaire des hormones stéroïdes activé par un ligand, qui agit comme facteur de transcription afin de coordonner des programmes géniques dépendants de la progestérone. Après liaison de l’hormone, PGR régule l’accessibilité de la chromatine et des réseaux transcriptionnels contrôlant le développement des tissus reproducteurs, la progression du cycle cellulaire, la différenciation et la signalisation inflammatoire, via des interactions avec les co‑régulateurs des récepteurs stéroïdiens et les voies MAPK/PI3K. L’activité spécifique des isoformes (PR‑A et PR‑B) façonne des réponses dépendantes du contexte dans l’endomètre, le sein et l’ovaire, en influençant la communication épithélio‑stromale et la sensibilité hormonale. Une signalisation PGR dérégulée et une expression altérée du récepteur sont fréquemment étudiées dans les cancers hormono‑dépendants et les troubles de la reproduction, où elles modulent la prolifération, l’invasion et les mécanismes de résistance endocrine.

Progesterone Receptor Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PGR sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Progesterone Receptor Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PGR dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PGR, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Progesterone Receptor. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PGR natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Progesterone Receptor au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Progesterone Receptor dans les cellules tumorales présentant une expression de PGR silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.