Plasmide CRISPR/Cas9 KO Profilin-2 (h): sc-403456

Présentation

PFN2 code la profiline‑2, une protéine se liant aux monomères d’actine qui régule la dynamique de polymérisation de l’actine et le remodelage du cytosquelette. La profiline‑2 module l’assemblage des filaments en réponse à la signalisation par les phosphoinositides et à des ligands riches en proline, en coordonnant des processus tels que la croissance des neurites, le trafic des vésicules synaptiques et la plasticité des épines dendritiques dépendante de l’activité. Par son rôle dans l’organisation des réseaux d’actine, PFN2 contribue à des voies qui contrôlent les changements de forme cellulaire, la dynamique membranaire et les comportements liés à la migration. Les altérations de la fonction de la profiline‑2 et du contrôle cytosquelettique en aval ont été étudiées dans le contexte de la connectivité neuronale et de phénotypes neurodéveloppementaux ou neurodégénératifs, lorsque l’homéostasie de l’actine est perturbée.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Profilin-2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PFN2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PFN2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PFN2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Profilin-2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PFN2 pour l'étude de la signalisation de Profilin-2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PFN2 essentiels à la fonction de Profilin-2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PFN2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Profilin-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Profilin-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PFN2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Profilin-2 plasmide HDR (h) et le Profilin-2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PFN2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PFN2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.