PRMT7 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-417516-ACT

PRMT7 (Protein-Arginin-Methyltransferase 7) ist eine PRMT vom Typ III, die die Monomethylierung von Argininresten an Histonen und Nicht-Histon-Substraten katalysiert und dadurch die Chromatinzugänglichkeit sowie Protein-Protein-Interaktionen beeinflusst. Durch die Regulation von Transkriptionsprogrammen, RNA-assoziierten Prozessen und zellulären Stressantworten trägt PRMT7 zur Kontrolle von Proliferation, Differenzierung und DNA-Schadens-assoziierter Signalübertragung bei. Eine veränderte PRMT7-Aktivität wurde mit dysregulierten epigenetischen Zuständen und einer Umgestaltung von Signalwegen in verschiedenen Krankheitskontexten in Verbindung gebracht, einschließlich der krebsassoziierten transkriptionellen Reprogrammierung. Als Methyltransferase, die mit Chromatin und regulatorischen Netzwerken interagiert, wird PRMT7 häufig im Zusammenhang mit Mechanismen der Genexpressionskontrolle und epigenomabhängigen Phänotypen untersucht.

PRMT7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PRMT7-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PRMT7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PRMT7-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PRMT7-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PRMT7-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PRMT7-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PRMT7-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PRMT7-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PRMT7-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.