Plásmido Doble Nickase (h) PRMT5: sc-401115-NIC

PRMT5 codifica la proteína arginina metiltransferasa 5, una importante metiltransferasa de tipo II que cataliza la dimetilación simétrica de residuos de arginina en histonas (p. ej., H4R3 y H3R8) y en numerosos sustratos no histónicos. A través de estas marcas de metilación, PRMT5 ayuda a coordinar el estado de la cromatina, los programas transcripcionales y el metabolismo del ARN, incluida la biogénesis de snRNP y el empalme del pre-ARNm mediante la metilación de proteínas Sm. La actividad de PRMT5 se integra con la regulación epigenética y el control del ciclo celular, influyendo en la proliferación, la diferenciación y las vías de respuesta al estrés. La disfunción de PRMT5 se ha asociado con alteraciones del empalme y con firmas de represión transcripcional observadas en múltiples contextos relevantes para enfermedades, lo que la convierte en un nodo ampliamente estudiado en el control de la expresión génica.

PRMT5 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PRMT5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PRMT5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PRMT5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PRMT5 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.