PRMT2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405107-ACT

PRMT2 (Protein-Arginin-Methyltransferase 2) ist ein humanes, SAM-abhängiges Enzym, das die Arginin-Methylierung an Histon- und Nicht-Histon-Substraten katalysiert und dadurch die Chromatinzugänglichkeit sowie das Transkriptionsprofil beeinflusst. Durch die Modulation von Protein-Protein-Interaktionen und epigenetischer Signalgebung wirkt PRMT2 auf Prozesse wie die Transkriptionsregulation, RNA-Prozessierung und die Kontrolle des Zellzyklus ein. Die PRMT2-Aktivität überschneidet sich mit Transkriptionsprogrammen von nukleären Rezeptoren und entzündungsassoziierten Signalwegen, wodurch ihre Regulation mit Pfaden verknüpft ist, die zelluläre Differenzierung und Stressantworten steuern. Eine veränderte PRMT2-Expression oder eine gestörte, methylierungsabhängige Signalübertragung wurde mit fehlregulierten Genexpressionszuständen in verschiedenen krankheitsrelevanten Kontexten in Verbindung gebracht, was ihre Untersuchung in mechanistischen und pathway-orientierten Studien unterstützt.

PRMT2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PRMT2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PRMT2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PRMT2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PRMT2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PRMT2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PRMT2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PRMT2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PRMT2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PRMT2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.