Particules Lentivirales d'Activation (m) PRL-R: sc-422418-LAC

Prlr chez la souris code le récepteur de la prolactine (PRL-R), un récepteur de cytokines de classe I qui assure la transmission des signaux dépendants de la prolactine impliqués dans le développement de la glande mammaire, la physiologie de la reproduction, la régulation métabolique et la fonction des cellules immunitaires. La liaison du ligand favorise la dimérisation du récepteur et l’activation de JAK2, déclenchant en aval des programmes transcriptionnels dépendants de STAT5 ; elle peut aussi interagir avec les voies PI3K/AKT et MAPK/ERK afin d’influencer la prolifération, la différenciation et la survie cellulaires. La signalisation du PRL-R contribue au dialogue entre réseaux endocriniens et inflammatoires, faisant de Prlr un nœud pertinent pour étudier la transcription sensible aux hormones, la spécification des lignages épithéliaux et la dynamique de signalisation des récepteurs de type cytokine. Une activité altérée de la voie PRL-R a été associée à un remodelage tissulaire dérégulé et à un contrôle anormal de la croissance dans des contextes sensibles aux hormones, ce qui soutient des recherches mécanistiques dans des modèles de biologie endocrinienne et mammaire.

Les particules d'activation lentivirales PRL-R (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Prlr dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PRL-R (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Prlr, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de PRL-R. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Prlr ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.