PRIM2A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422397

Übersicht

Prim2 kodiert PRIM2A, die große katalytische Untereinheit der DNA-Primase innerhalb des Pol-α–Primase-Komplexes, der RNA–DNA-Primer synthetisiert, die für den Start der DNA-Replikation sowohl am führenden als auch am verzögerten Strang erforderlich sind. PRIM2A unterstützt das Feuern von Replikationsursprüngen, die Priming-Reaktion für Okazaki-Fragmente und den gesamten Verlauf der S-Phase; seine Funktion ist eng in den Aufbau des Replisoms und den Wechsel der DNA-Polymerasen integriert. Eine Störung der Primase-Aktivität dürfte den Replikationsstress erhöhen, die Stabilität der Replikationsgabel beeinträchtigen und die Abhängigkeit von DNA-Schadensantwort- und Checkpoint-Signalwegen verstärken. Als zentraler Replikationsfaktor ist PRIM2A breit relevant für Studien zur Genomstabilität, zur Kontrolle der Zellproliferation sowie zu Mechanismen, die Replikationsdefekte mit der Biologie von Erkrankungen mit genomischer Instabilität verknüpfen.

Das PRIM2A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Prim2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Prim2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Prim2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PRIM2A-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Prim2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PRIM2A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Prim2-Exone abzielen, die für die PRIM2A-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Prim2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PRIM2A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom PRIM2A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Prim2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PRIM2A HDR-Plasmid (m) und PRIM2A HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Prim2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Prim2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.